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T細胞活化

抗原和共刺激信號對幼稚 T 細胞的激活啟動了 CD4+ 輔助和 CD8+ 細胞毒性 T 細胞的克隆擴增。除了 T 細胞增殖外，多種信號通路被激活，導致功能性細胞表面標志物的表達和細胞因子的釋放。

專注于利用免疫系統(tǒng)靶向癌癥的療法（雙特異性、檢查點抑制劑抗體和 CAR-T 細胞）市場正在不斷增長。監(jiān)測和量化激活曲線的能力有助于更好地了解 T 細胞如何對某些刺激作出反應，進而可以深入了解藥物能夠如何利用免疫系統(tǒng)的力量。

分析概念

在單個孔中測量 T 細胞活化、增殖和細胞因子釋放的多重方法。

圖 1. 人類 T 細胞激活試劑盒檢測原理說明。針對 3 種激活標志物的表達分析了不同的 T 細胞表型：CD69（早期）、CD25（晚期）和 HLA-DR（甚至更晚）。2 種效應細胞因子（IFNγ 和 TNFα）也使用 2-plex Qbeads 在同一孔中以夾心免疫測定形式進行量化。可以同時測量 T 細胞增殖或編碼的靶細胞，但不包括在此插圖中。

主要優(yōu)勢

在生理相關模型中獲得對 T 細胞活化狀態(tài)的更多生物學見解

同時量化表面蛋白和細胞因子的表達

易于使用和解釋；預定義的門控策略

最少的樣品操作：小體積、一次洗滌、無需稀釋、混合和讀取

圖 2. 激酶抑制劑篩選突出了人類 T 細胞激活曲線的變化。

PBMC 用一組激酶抑制劑 (20 µM) 處理一小時。然后添加 CD3/CD28 Dynabeads 以刺激激活 24 小時。使用 T 細胞激活細胞和細胞因子分析試劑盒和 iQue 系統(tǒng)分析 10 µL 樣品。

(A) CD4+CD69+ 門控策略的板視圖。綠色框標識僅媒體控件。紅框標識環(huán)孢菌素對照。黃色框標識圖 BD 上顯示的化合物（1：魯索替尼；2：雙吲哚基馬來酰亞胺 I；3：AZD 7762）。

(B, C) CD4+ 和 CD8+ 細胞上 CD69、CD25 和 HLA-DR 的表達。

(D)從 PBMC 釋放 IFNγ 和 TNFα 細胞因子。

同時量化表面蛋白和細胞因子的表達

圖 3. 量化從不同供體分離的 PBMC 的激活曲線和細胞因子釋放的變異性。

SKOV-3 細胞與來自 3 個供體的 PBMC（10K/孔）在共培養(yǎng)試驗中接種（4K/孔）。激活由 CD3/CD28 Dynabeads 誘導。4 天后按照貼壁細胞提升方案提升細胞，并使用 T 細胞激活細胞和細胞因子分析試劑盒進行分析。(AC)早期 (CD69)、晚期 (CD25) 甚至晚期 (HLA-DR) T 細胞活化標志物的表達。(D)每個供體釋放 IFNγ。

最少的樣品操作：小體積，一次洗滌，無需稀釋

將細胞和上清液作為一個樣本的簡單協(xié)議，可簡化工作流程。

無需標記或補償優(yōu)化步驟。

對于高級流式細胞術，細胞表型分析和細胞因子檢測如何在同一個孔中工作？

iQue ® 人類 T 細胞激活試劑盒使用多重方法同時進行激活的 T 細胞免疫表型分析和細胞因子檢測。該試劑盒提供了用于鑒定活化 T 細胞的適當抗體，以及 用于檢測和定量分泌的 IFNg 和 TNFa 的iQue Qbeads ® 。將兩種組分與活性染料一起添加到每個測定孔中，并與細胞和上清液樣品混合物一起孵育。然后預設門控策略將熒光信號從細胞和珠子中分離出來，并自動填充隨附的模板，以表達 T 細胞群和細胞因子濃度的數(shù)據(jù)。

我想在幾天內測量 T 細胞活化 (TCA)，我需要在不同的板中設置幾個不同的測定嗎？這會殺死細胞嗎？

iQue ® 人類 T 細胞激活試劑盒允許在一個時間過程中使用單個測定板進行多次測量。使用 T 細胞激活試劑盒進行分析只需要少量 (10 µL) 細胞和上清液樣本，這意味著一旦采集了每個樣本（在通風柜中無菌），檢測板就可以放回培養(yǎng)箱中準備好你的時間過程中的下一個樣本。在取樣之前，建議輕輕研磨內容物以確保取樣均勻，但這不會影響細胞，也不會影響小樣本量。  

在 T 細胞激活測定中，對多重 3 種或更多細胞因子檢測是否有任何限制？我可以在此測定中測量其他細胞因子和標志物嗎？

iQue ® 人類 T 細胞激活試劑盒可與 iQue ® 人類 T 細胞配套試劑盒結合使用，除了已包含在 T 細胞激活試劑盒中的細胞因子外，還可以測量多達 6 種人類細胞因子。Sartorius 還提供一系列細胞因子和趨化因子檢測 iQue Qbeads ®  ，以便客戶可以制作自己的附加面板，以與 T 細胞激活試劑盒進行多路復用。單個 10 µL 樣品可用于分析多達 30 種分泌蛋白，客戶可以從 50 多種分析物中選擇進行定量。而且，如果您的特定分析物不在我們當前的產品組合中，iQue Qbead ® Devscreen 試劑允許您靈活地連接您自己的捕獲抗體或目標蛋白，以獲得更加定制的個性化解決方案。

iQue 試劑盒提供了一個集成的解決方案，使高含量，高通量，流式細胞術為基礎的分析洞察復雜的生物學。IQueReagent 試劑盒已經開發(fā)出來，可以在 iQueAdvanced 流式細胞術平臺上運行，并使用 iQueFozet 軟件進行分析。

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