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    Peps6-捕獲BAC試劑盒 說明書

    發布時間: 2025-06-11  點擊次數: 331次

    Apohtech ? 產品與服務

    Peps6-捕獲BAC試劑盒

     

     

    描述:

    Peps6-CaptoBAC試劑盒在大多數樣本中進行細菌捕獲。它包括涂有Peps6的磁珠和一種特別開發的緩沖液,以確保最佳的細菌捕獲。 根據試劑盒說明,將樣本稀釋在緩沖液中,然后加入磁珠。經過短暫的振蕩孵育后,去除上清液,同時磁鐵(不提供)將磁珠固定在下方。然后細菌在磁珠上濃縮,并且沒有潛在的抑制劑。它們可以用常規檢測方法進行分析。 該產品的保質期為2年,保存在2-8°C。該產品有2550測試格式可供選擇。

     

    參考編號:MP10031-50T

    • 數量:50次測試

    成分:

    • 1 mLPeps6磁珠(編號:MP20006-1ML

    • 50毫升緩沖液TTGB 10X(編號:TP10004-50ML

     

    Peps6-捕獲BAC試劑盒

    描述:

    Peps6-CaptoBAC試劑盒在大多數樣本中進行細菌捕獲。它包括涂有Peps6的磁珠和一種特別開發的緩沖液,以確保最佳的細菌捕獲。 根據試劑盒說明,將樣本稀釋在緩沖液中,然后加入磁珠。經過短暫的振蕩孵育后,去除上清液,同時磁鐵(不提供)將磁珠固定在下方。然后細菌在磁珠上濃縮,并且沒有潛在的抑制劑。它們可以用常規檢測方法進行分析。 該產品的保質期為2年,保存溫度為2-8°C。該產品有2550測試格式可供選擇。

     

    參考編號:MP10031-25T

    • 數量:25次檢測

    成分:

    • 0.5 mLPeps6磁珠(參考編號:MP20006-0.5ML

    • 25 毫升緩沖液 TTGB 10X(參考編號:TP10004-25ML

                                                    

    1. 簡介

    合成分子 Peps6 源自載脂蛋白 HApoH),保留了其結合微生物的能力,包括病毒(1-2)、真菌(3)和細菌(4-6)。ApoH 蛋白也稱為載脂蛋白 H  β2 - 糖蛋白 1,其多特異性允許對多種微生物進行多重捕獲。這種親和捕獲方法簡單、溫和且快速,可使微生物保持活力和感染性。捕獲的微生物被濃縮并與潛在抑制劑分離,從而更易通過常規特異性技術(如 PCRELISA 等)進行鑒定 / 檢測,顯著提升靈敏度(7-10)。
    這些特性使 Peps6-CaptoBAC 試劑盒成為一種創新的樣品預處理工具,用于細菌分離,以便進行高靈敏度的鑒定 / 檢測。

    2. 123原理

     Peps6-CaptoBAC 試劑盒中,Peps6 與磁珠結合。試劑盒提供一種特殊結合緩沖液,可增強 Peps6 對細菌的親和力。將 Peps6 磁珠加入任何復雜生物樣本中(用提供的緩沖液稀釋),樣本中的初始雜質和潛在抑制劑可被去除,而通過 Peps6 與磁珠結合的細菌則通過磁鐵保留在試管中。隨后,細菌可通過分子技術(PCR)、免疫檢測(ELISAWB)或在合適培養基中培養等方法進行鑒定 / 檢測。

    3. 45試劑

    REF MP20006 – Peps6 磁珠
    合成 Peps6 包被的磁珠懸浮液濃度為1013個珠子 / 毫升,珠子直徑約 200 nm,緩沖液含 < 0.02% 疊化鈉。
    REF TP1006704 – TTGB 10X 
    緩沖液
    TTGB 10X 
    緩沖液為淺黃色水性結合緩沖液,經 0.2 µm 過濾,濃縮 10 倍,使用前需按說明稀釋。
    注意:試劑盒中89的所有試劑均可單獨購買。

    4. 10存儲

    • 所有試劑可在室溫下運輸,功能不受影響;收到后需存儲于           2-8°C

    • 所有試劑在 2-8°11C 下可穩定保存至有效期。

    • Peps6 磁珠瓶需12直立存放,確保磁珠始終浸沒在存儲液中。

    • 使用后,所有試劑需13迅速放回 2-8°C 存儲。

    5. 14所需材料(未提供)

    • 無菌蒸餾水。

    • 合適的微量移液器和無菌濾芯吸頭。

    • 合適的反應管(玻璃或聚丙烯塑料材質,避免聚苯乙烯)。

    • 孵育過程中用于樣品15攪拌的設備。

    • 溫控培養箱。

    • 層流罩或目標微生物所需的特定微生物環境。

    • 與試管兼容的側向磁16吸裝置(注意:不同市售磁鐵的吸引力和速度可能不同)。

    • 目標微生物檢測所需17的材料和試劑。

    6. 18安全注意事項

    • 為確保穩定性,所有試劑需小心處理,避免污染。

    • 是否需要無菌操作區19域取決于捕獲微生物的用途(如需培養則必須無菌)。

    • Peps6 磁珠存儲20緩沖液含 < 0.02% 疊化鈉,痕量疊化鈉不影響捕獲或微生物活力,使用前無需清洗磁珠。疊化鈉可能與銅或鉛管道反應生成爆炸性疊氮化物,通過管道處理時需用大量水沖洗,防止疊氮化物堆積。

    • 試劑和樣本需按照良21好實驗室規范處理,未使用的試劑、樣本和廢棄物需按當地法規處置。

    • 請勿使用過期試劑。22

    7. 23重要提示

    本方案為最多 5 mL 樣本中細菌結合的通用指南,根據細菌菌株、樣本性質和體積,可能需要進一步優化以實現最佳結合能力。
    ApoH 
    捕獲機制不同于24常規抗原 - 抗體相互作用,如需確保實驗成功,請聯系我們的技術支持。
    捕獲細菌前,Peps62526磁珠不得渦旋、冷凍、干燥、高溫(>60°C)或端 pH>9  < 5)處理。若需保留微生物活力,捕獲后也需遵循同樣注意事項。

     

    • 若懷疑微生物負載較27高,可增加磁珠體積。磁珠可結合大量微生物:1 µL 磁珠可從純培養物中結合1×107個大腸桿菌。

    8. 28樣本采集與處理

    現有數據表明,Peps6 磁珠可捕獲各種固體(懸浮后)或液體樣本中的細菌。

     

    • 固體樣本(如肉類、29組織)需在 1X 捕獲緩沖液中研磨,過濾后再加入磁珠,否則磁珠可能被樣本顆粒卡住,無法磁化。

    • 優先使用新鮮樣本,30避免混合樣本。混合血液、血清或血漿可能形成凝塊,捕獲并聚集磁珠,使其無法結合微生物。

    • 若進行細菌添加實驗31,需使用臨床菌株而非 “標準菌株"(如 ATCC 菌株),許多標準菌株對 ApoH 蛋白或 Peps6 分子的親和力會下降。

    • 使用全血時,需選擇32EDTA 抗凝劑。

    • 所有稀釋或處理后的33樣本需迅速與 Peps6 磁珠接觸。

    • 樣本體積可按比例調34整,若懷疑微生物滴度較低,可擴大樣本體積。超過 5 mL 的樣本,需聯系技術支持。
                
      受損微生物可能失去對 A35poH 蛋白或      Peps6 分子的親和力,因此:

    • 優先使用新鮮樣本材料。

    • 檢查冷凍樣本中細菌36的活力,避免樣本反復凍融。

    • 使用劣質樣本會導致37靈敏度下降。

    9. 38使用說明

    樣本在捕獲緩沖液中的稀釋
    將樣本稀釋于捕獲緩沖液中并渦旋,稀釋后緩沖液終濃度必須為 1X

     

    • 小體積樣本(1-199 µL:將 TTGB 10X 緩沖液用無菌蒸餾水稀釋至 1X,加入足夠的 1X TTGB 緩沖液,使樣本總體積達到 1      mL

    • 大體積樣本(039.2-5.0 mL:將 TTGB 10X 緩沖液用無菌蒸餾水稀釋至 2X,按 1:1 體積比加入樣本中。

     

    捕獲步驟 40

    • 使用前,通過輕柔吹打或手動倒置底重懸 Peps6 磁珠(切勿渦旋)。

    • 每個樣本加入 20 41µL      Peps6 磁珠。

    • 輕輕混勻(切勿渦旋42)。

    •  35-37°C 43適當攪拌孵育 30 分鐘:試管需直立并劇烈攪拌,使磁珠保持懸浮狀態(如設置 Thermomixer  1000 rpm)。

    • 將反應管置于磁鐵上44,直至所有磁珠側向沉淀且上清液澄清。

    • 棄去上清液,避免擾45動磁珠沉淀,細菌即濃縮于沉淀中。

    洗滌(可選)46
    純培養物、血漿或血清無需洗滌,全血等復雜樣本可能需要洗滌:

    • 向磁鐵上的磁珠沉淀中輕輕加入 1 mL      PBS(不含Ca2+/Mg2+),勿重懸磁珠。

    • 棄去上清液,避免擾47動沉淀。

    • 如需可重復洗滌一次48

    10.49 細菌檢測

    結合的細菌可直接在 Peps6 磁珠上通過標準方案檢測(必要時可調整)。注意:小體積樣本需在加入重懸液前短暫離心磁珠沉淀。

     

    • 培養:將磁50珠重懸于合適培養基中,直接涂布于培養皿,在細菌適宜溫度下孵育。

    • PCR:將51磁珠重懸于裂解緩沖液中,劇烈渦旋 15 秒以破壞沉淀。裂解后,通過磁鐵或離心(10,000 g分鐘)去除磁珠,轉移上清液至新管,按常規流程提取 DNA 并進行 PCR

    • 顯微鏡觀察52:將磁珠重懸于 PBS 或特定培養基中,磁珠無自發熒光,可用于熒光檢測。

    • 其他方法53將磁珠重懸于適當溶液中,如需其他特定應用,請聯系技術支持。

    11.54 故障排除

    以下為常見問題指南,如需進一步幫助或定制方案,請聯系技術支持。
    磁珠和緩沖液處理55

    • 需在無菌環境中打開 Peps6 磁珠瓶,污染會降低穩定性和效率。

    • 必須將磁珠加入樣本56中,而非反向操作。

    • 使用無菌蒸餾水稀釋57緩沖液,確保混合后 TTGB 緩沖液為 1X 濃度。

    • 檢查 TTGB 緩沖液58是否污染。

    • 根據微生物或樣本類59型,可優化捕獲緩沖液的選擇和用量。

     

    大體積樣本 60

    • 5-100 mL 大體積樣本需額外購買磁珠和緩沖液。

    • 樣本稀釋:直接加入612X  10X 濃縮的 TTGB 緩沖液,使終濃度為 1X

    • 每個樣本加入 20 62µL 磁珠,超過 10 mL 的樣本可能需要增加磁珠體積。

    • 超過 20 mL 的樣63本可采用軌道攪拌(設置為 3 rpm)代替直立攪拌。

    • 大體積樣本需預溫至64室溫或孵育溫度后再加入磁珠。

     

    孵育
    -65 
    嚴格遵循溫度和時間以確保最佳結果。

    • 選擇足夠大的試管以66保證充分攪拌(如 1 mL 反應用 1.5 mL 試管)。

    • 試管需直立并劇烈攪67拌(如 1000 rpm),使用玻璃或聚丙烯試管,避免聚苯乙烯。

     

    磁化
    -6869 
    若上清液中殘留磁珠或沉淀被吸頭擾動,需延長磁化時間(細胞培養樣本通常 2 分鐘,全血樣本可達 15 分鐘)。

    • 使用高能釹磁鐵(870-12 kg 吸引力)確保磁珠全磁化,磁力過低會導致磁珠和微生物損失,過強可能使磁珠嵌入塑料管。

    • 吸棄上清液前需去除71氣泡。

    • 磁化時間不得超過 3720 分鐘,以免破壞微生物完整性。

     

    洗滌
    -73 
    細胞上清液、血漿或血清無需洗滌(除非檢測系統高度敏感),全血等復雜樣本可能需要洗滌 2 次,洗滌時需在磁鐵上操作,切勿渦旋。

     

    • PBS 可替換為其他74洗滌緩沖液,需聯系技術支持確認兼容性。

     

    檢測
    -75 
    部分細菌捕獲后無法培養(處于活但不可培養狀態),需通過顯微鏡或 PCR 驗證捕獲效果。

    • 裂解步驟至關重要,76裂解緩沖液效率取決于化學組成,建議添加裂解對照,可劇烈渦旋磁珠以確保裂解充分。

    • 如需光密度測量,需77用磁鐵去除磁珠,僅檢測上清液(磁珠呈深棕色,會嚴重干擾光學測量)。

     

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