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    Abwayss常見問題

    發布時間: 2021-06-22  點擊次數: 1114次

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    β肌動蛋白抗體

    貨號: AB0035規格 : 50μl, 100μl

    摩爾重量: 42kDaUniProt : P60709

    同種型:兔 IgG克隆性:單克隆

    可用性 :次日發貨

    產品數據表

    β肌動蛋白抗體

    貨號:AB0035 反應性:人鼠鼠

    同種型:兔 IgG 應用:WB IHC ICC/IF

    UniProt IDP60709

    所有名稱:ACTIN;行動管制局; β-肌動蛋白; β 肌動蛋白;肌動蛋白β;

    形式:液體

    儲存說明:在 +4°C 下短期儲存。長期儲存在-20°C。避免冷凍/解凍循環。

    儲存緩沖液:pH 7.4150mM NaCl、和 50% 甘油。

    純度:親和色譜

    免疫原:合成肽

    分子量:42 kDa

    白平衡 1:3000~1:10000

    IHC 1:50~1:200

    ICC/IF 1:50~1:200

    β-肌動蛋白是已鑒定的六種不同的肌動蛋白亞型之一。在細胞中發現的肌動蛋白分子

    各種物種和組織的免疫學和物理特性往往非常相似。所以,

    針對 β-肌動蛋白的抗體可用作蛋白質印跡的加載對照。不過需要注意的是

    β-肌動蛋白的水平在某些細胞中可能不穩定。例如,β-肌動蛋白在脂肪中的表達

    組織非常低,因此不應用作這些組織的加載控制。

     

    Abwayss常見問題

    問:我應該如何儲存我的抗體管?溫度對穩定性的影響有多大?

     

    A:請將抗體保存在-20°C 的原始試管中,不要等分。避免反復凍結!

     

    問:我應該如何儲存細胞裂解物?

     

     A:細胞裂解液可在-20°C 下短期使用,但應在-80°C 下長期保存。活化蛋白質樣品的降解變化很大,這取決于蛋白質的性質和樣品中活化蛋白質的含量。

     

    問:我可以將該抗體在室溫下孵育 1 小時而不是在 4°C 下孵育過夜嗎?

     

     答:我們的活化特異性抗體經過純化,可僅區分一或兩個翻譯后修飾的氨基酸殘基。這些修飾包括磷酸化、乙酰化和酶切。與識別完整蛋白質的抗體相比,針對此類修飾位點產生的大多數抗體具有較低的親和力。因此,通過在 4°C 下孵育過夜來延長抗體和抗原相互作用時間以獲得最佳信噪比至關重要。

     

    問:如果一個物種沒有在數據表上列為與抗體交叉反應,這是否意味著該物種沒有經過測試?

     

    答:如果我們在一個物種中沒有獲得陽性結果,我們不會列出該物種。我們測試的細胞系可能含有低水平的特定蛋白質,或者我們使用的誘導在該特定細胞系中不起作用。因此,我們強烈建議您比較正在研究的物種和我們的抗體針對的物種之間修飾位點周圍的肽序列(每側 5 個氨基酸)。在大多數情況下,我們的抗體是針對人類蛋白質序列產生的,并使用親和層析進行高度純化。很多時候,如果序列相同或在修飾位點以外的殘基上只有 1 2 個氨基酸差異,則抗體很有可能識別您的蛋白質。

     

    問:為什么我不能對你們的抗體使用我自己實驗室的蛋白質印跡實驗方案?

    答:我們的抗體經過優化,可使用我們的標準蛋白質印跡實驗方案以最少的背景提供*的信號。與您自己的程序相比,使用我們的協議,您將節省時間和材料。

     

    問:為什么這種抗體不能通過蛋白質印跡起作用?

     

     答:我們的蛋白質印跡程序有幾個細節對于避免信號丟失和/或高背景至關重要。不要過度清洗膜。應使用 TBS/0.1% Tween-20 清洗 3 次,每次 10 分鐘。過度洗滌會洗掉一抗。推薦的洗滌條件經過優化以產生最佳的信噪比,從而獲得*、最干凈的結果。不要過度阻塞(例如,超過一小時或過夜)。過度封閉會降低某些抗體的特異性信號。請務必查閱各個產品的數據表,了解每種抗體的推薦封閉時間。您正在測試的物種是否列在抗體數據表的交叉反應部分中?您是否加載了至少 20 µg 的總細胞裂解液?您是否誘導了細胞裂解物樣品中蛋白質的活化?

     

    問:我如何才能確保可重復的西方結果?

     

     A : 關于為什么蛋白質印跡結果似乎難以重復,有幾種可能性。要找出這種情況的原因,請考慮以下事項: 您是如何儲存抗體的?抗體在稀釋緩沖液中稀釋后不能重復使用。許多抗體的工作濃度非常低,每次連續印跡時濃度可能會降低。您確定您的樣品中含有活化蛋白嗎?用于活化蛋白質的細胞裂解物樣品制備可能因細胞數量、藥物誘導時間、細胞傳代次數和儲存條件而異。我們的產品有望在保質期內以最佳水平運行。

     

    問:如何使用固定化抗體進行 IP

     

     答:為了獲得最佳結果,獲得均勻的珠漿很重要。以下步驟將確保這種均勻性:將含有珠漿的管子放在冰桶中 10 分鐘。將管子倒轉幾次,以獲得 50% 的珠到緩沖液漿液。如有必要,輕輕渦旋管。為了準確地吸取產品,切掉移液器吸頭的末端并將吸頭插入珠漿中,剛好足以吸取固定的抗體珠混合物。將固定化抗體與 200 µg 總細胞裂解物(約 1 mg/ml)以及推薦的抗體稀釋度在 4°C 下孵育過夜。

     

    問:該抗體對 IHC 有效嗎?

     

     答:我們會定期測試用于福爾馬林固定石蠟包埋樣品的抗體。IHC-P 推薦通過嚴格驗證標準的那些。我們還在新鮮冷凍組織樣本上測試產品,推薦成功染色的產品用于 IHC-F。那些沒有將 IHC-P IHC-F 列為推薦應用的產品可能已經失敗,可能沒有經過測試,或者可能需要我們無法獲得的特定組織樣本。建議您  就您感興趣的產品缺乏 IHC 建議的性質與我們聯系,因為可能有數據表明它可以在另一個系統中運行良好。或者,我們可能有數據表明另一種產品將是組織染色的更好選擇。

     

    問:這種抗體對 IF 有效嗎?

     

     答:我們在大多數情況下通過免疫細胞化學測試了所有抗體,在某些情況下通過免疫熒光測試了所有抗體。最終結果顯示在數據表和網站上,或通過網站聯系我們以 獲取更多詳細信息。

     

    問:你們如何保證抗體的質量?

     

     答:Abwayss 努力在主要應用中測試我們所有的產品,例如蛋白質印跡、免疫細胞化學、免疫組織化學、FACS IP。我們定期在不同的細胞或組織樣本(包括人類、小鼠和大鼠)上測試我們的抗體。我們產品的高質量是 Abwayss 最重要的考慮因素。我們不斷針對新應用測試我們的產品,如果您對數據表中未列出的特定應用感興趣,請通過網站聯系我們的技術支持以獲取最新應用更新或幫助解決您的任何問題。

     

    問:您如何控制不同批次的質量?

     

    答:Abways努力實現產品的一致性或逐批改進。作為標準,我們在我們推薦的所有應用中測試新批次與舊批次。每個應用的推薦稀釋度都按照我們的協議針對每個批次進行了優化。有時會調整大量抗體之間的濃度以獲得更好的結果。

     

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