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北京華新康信對Brainbitsllc常見問題進行解答
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Brainbitsllc常見問題：
媒體
1. 混合 B27 補充劑 / Neurobasal 培養(yǎng)基 / 0.5 mM 谷氨酰胺后，培養(yǎng)基能穩(wěn)定多久？
我們在 4 o C 的黑暗中儲存長達 6 個月。
2. 我需要多久補充一次 Neurobasal/B27/谷氨酰胺？
我們每 3 到 4 天更換 1/2 培養(yǎng)基，但這部分取決于細胞密度。參見 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果細胞密度高于 500/mm 2 ，則每 2 天更換 1/2。
3. 我可以用一些 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺（無谷氨酸鹽）來稀釋 BrainBits 附帶的 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺 + 谷氨酸鹽，比如 1:2 稀釋，細胞仍然生長嗎？
是的，但也不是。請參閱上面引用的 FOCUS 文章。
4. 您通常在培養(yǎng)第 4 天之前向 Neurobasal/B27 添加 25 uM 谷氨酸鹽。谷氨酸的目的是什么？
它幫助海馬神經元發(fā)芽并促進活力。
5. 不加谷氨酸有問題嗎？
在 4 DIV 時，您的存活率將降低約 30%。
6. 我需要一些培養(yǎng)基或試劑來維持培養(yǎng)物嗎？
您將需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基板。該訂單包括足夠的培養(yǎng)基來開始培養(yǎng)并維持 4 或 5 天。除此之外，您將需要更多培養(yǎng)基，我們可提供完整的即用型 NbActv1 配方，也可通過 Invitrogen 單獨購買。
7. 我應該用抗生素/抗真菌劑補充 B27/Neurobasal 培養(yǎng)基嗎？例如：pen/strep/fungizone 或慶大霉素？
我們通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌劑的情況下進行培養(yǎng)，并取得了良好的效果。這具有三個優(yōu)點：
首先，當出現(xiàn)污染時，更容易確定污染源。其次，如果您使用抗生素，當您感染時，就更難擺脫。第三，抗生素已被證明可以激活神經元中的癲癇樣爆發(fā)活動。然而，我們有時會在慶大霉素 (10 ug/ml) 中開始培養(yǎng)，并在細胞粘附后一小時后將其沖洗干凈。
休眠®
*Hibernate、Neurobasal 和 B27 僅用于研究目的，由 Invitrogen Corporation 制造。Hibernate、Neurobasal 和 B27 是 Invitrogen Corporation 的商標。
1. 我可以使用 Hibernate 進行木瓜蛋白酶治療嗎？
BrainBits LLC 提供 5 ml 不含 B27 的 Hibernate-Ca，用于在 15 ml 無菌離心管中最佳分離 BrainBits 與木瓜蛋白酶。加入木瓜蛋白酶 (Worthington) 后，在 37 o C 下溶解10 分鐘。您需要使用 0.2 µm 過濾器對溶液進行消毒。
2. 你是否總是在 Hibernate 中添加 B27 谷氨酰胺，或者它是否仍然在 Hibernate 中保持細胞存活？
幾乎總是。請參見 Brewer and Price (1996) PM:8856709 的圖 1 在 37 0 C 環(huán)境 CO2 中，Neurobasal/B27/gln 中的 LD50 為 24 小時，休眠/B27/gln 中為 >3 天。
3. 我們可以提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate 嗎？
是的，事實上我們有幾個客戶提出了這個要求。因此，我們可以以相同的價格提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate A。您只需要告訴我們您是希望用 NaCl 將滲透壓調整到正常水平還是低于平常水平，以便您可以自行調整。
4. Hibernate 的其他用途包括：
轉基因小鼠基因分型過程中的大腦儲存
將腦組織運送給合作者
基質
1. 我不經常使用聚-D-賴氨酸。我制作了 5 毫克/毫升的 (100x) 儲備溶液并將其等分到小冷凍管中。我可以將原液冷凍保存多久，并且仍然可以與海馬細胞一起使用？
大概是永遠。不要儲存在聚丙烯管中。聚苯乙烯或 PET 更好。解凍時一定要攪拌均勻。
2. 一些研究人員使用聚乙烯亞胺代替聚賴氨酸。一個比另一個有優(yōu)勢嗎？
PEI 比聚賴氨酸便宜。我們使用 PEI 并沒有取得多大成功，但 Mark Mattson 在開始在 Neurobasal/10% 血清中培養(yǎng)后一直使用它。報告表明神經元存活率或尖峰率沒有顯著差異。
Soussou WV、Yoon GJ、Brinton RD、Berger TW (2007) 在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經元的神經元網絡形態(tài)和電生理學。IEEE 跨生物醫(yī)學工程 54：1309-1320。 電話：17605362
Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海馬神經元在低密度限定培養(yǎng)基中的存活和生長：夾心培養(yǎng)技術或低氧的優(yōu)勢。大腦研究 494:65-74。電話：2765923
3. BrainBits 神經元越來越多地生長為細胞簇或團塊，而不是孤立的。怎么了？
這意味著細胞與自身的粘附比與基底更緊密。最可能的問題是基材準備不充分。將您的方案與推薦的聚賴氨酸制備和基材涂層進行比較。
4. 關于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸，我假設使用聚-D-賴氨酸，因為如果它分解成賴氨酸，細胞就不能使用d賴氨酸。有什么道理嗎？
這就是理論。在一些早期研究 (Brain Res. 494:65(1989)) 中，我們發(fā)現(xiàn)差別不大。
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